我們這里有做生物樣品的共焦拉曼顯微鏡的，在獲得的圖里面有很強的熒光，有的說，如果拉曼得不到就用其熒光譜。可我想問一下，在拉曼譜里面得到的熒光背景，是真正的熒光特征譜嗎?這和熒光光譜儀里面的熒光圖有什么區(qū)別?

1. 原則上說，拉曼譜中的熒光和熒光譜中的熒光是一樣的，只要激發(fā)波長和功率密度相同。注意橫坐標(biāo)要從波數(shù)變換為納米，即用10000000nm(1cm)除以波數(shù)就行了。但有一點要注意，不同波長的激發(fā)光照射樣品，得到的拉曼相近，但熒光可以有很大不同，甚至相同波長不同功率激發(fā)，熒光譜都大不一樣。

2. “注意橫坐標(biāo)要從波數(shù)變換為納米，即用10000000nm(1cm)除以波數(shù)就行了”?

Raman測定的是散射光，得到的是Raman shift. Raman shift和波長(熒光光譜)之間要一個轉(zhuǎn)換的吧。

3. 生物樣品一般熒光峰比較寬，用熒光光測試之前一般先會做儀器本身曲線校正也就是儀器本身的響應(yīng)曲線，這樣測出的熒光峰才比較準(zhǔn)，特別是對于寬峰更要做這個較準(zhǔn)。

而Raman光譜一般采集的區(qū)域比較窄(指的是波長區(qū)域)，一般在窄的波長范圍變化不大，因此一般不考慮儀器本身響應(yīng)曲線誤差，但是Raman光譜來測寬熒光峰，影響就比較大。